人CD3+ T细胞分选试剂盒

产品简介

人CD3+ T 细胞分选试剂盒是通过阴性分选法从人外周血单个核细胞（PBMC）中分离出CD3+ T 细胞。该试剂盒选用不同的生物素标记单克隆抗体对对非CD3+ T 细胞进行标记，随后通过链霉亲和素磁珠去除非CD3+ T 细胞，从而完成人外周血 CD3+ T 细胞的分选。

本产品15 min即可获得目的细胞，使用前无需裂红处理，分选的细胞无异常激活，可立即用于下游实验。本产品需与磁力架配套使用。

产品组成

产品特点

纯度高：分选细胞的纯度高，可达 95% 以上。
活性高：分选后细胞功能保持完好，无异常激活，无抗体和磁珠标记。
易操作：无需使用分离柱，通过磁力架即可实现目标细胞分离。
速度快：最快只需 15 min 即可获得目标细胞。

产品保存

2-8℃保存，不可冷冻。有效期一年。

操作流程图：

finiget分必得细胞分选

使用说明

该操作流程适用于处理0. 1-2 mL的样品（多达2×108 cells）。

1.   制备人PBMC：利用Ficoll 密度梯度离心法从人外周血中分离 PBMC ，收集 PBMC ，以 PBS 洗涤细胞，离心后将PBMC重悬于分选缓冲液中，调整细胞密度为1×108 cells/mL。
· 如果使用的是冻存的PBMC ，复苏后细胞成团块状，分选前样品需在室温下用浓度为 100 μg/mL 的DNase I 溶液孵育至少 15 min并用细胞筛过滤。
· 分选缓冲液推荐使用含有1 mM EDTA和2%胎牛血清（FBS）的PBS ，需预先使用0.22 μm滤膜过滤除菌。缓冲液中不能含有钙离子、镁离子和生物素。也可以使用GOONIE 140-2001 细胞分选缓冲液。
2.   吸取100 μL细胞悬液（1×107  cells）加入无菌流式管底部，再加入10 μL Human CD3+  T Cell Isolation Cocktail ，轻轻混匀，室温孵育10 min。
· 若分选更大数量的细胞可按比例增加Human CD3+  T Cell Isolation Cocktail的用量。
3.   孵育完成后，加入8 μL Streptavidin Beads ，轻轻混匀，室温孵育2.5 min。
· 磁珠在使用前需在涡旋震荡仪上充分混匀约30 s ，混匀后不可进行高速离心操作；若分选更大数量的细胞可按比例增加Streptavidin Beads的用量。
4.   孵育完成后，加入分选缓冲液将体积补至2.5 mL ，使用移液器轻轻吹打几次后将流式管置于磁力架上静置2.5 min。
· 实验体系不可超过2.5 mL ，以避免超过磁极的分选范围。
5.   将细胞悬液缓慢倒入无菌离心管中，此细胞悬液中即包含纯化的人CD3+ T细胞。
· 倾倒过程中流式管不能脱离磁力架。
6.  根据实验需要洗涤细胞后，将细胞重悬于所需缓冲液或培养基中，即可用于后续分子生物学或细胞生物学实验。
 

分选效果

Before isolation                                 After isolation

从人PBMC中分选CD3+ T细胞，分选前后的细胞用FITC anti-human CD3抗体（克隆号OKT-3）标记后进行流式细胞仪分析，分选前后的CD3+ T细胞纯度分别为60.4%和98.5%。

注意事项

1.   本试剂盒在保存和使用过程中应避免冷冻。
2.   建议使用低吸附移液器吸头和离心管，避免因吸附造成抗体和磁珠的损耗。
3.   分选过程应尽量轻柔，避免磁珠对细胞造成机械损伤。
4.   若后续进行细胞培养实验，分选过程需在无菌环境中进行。
5.   加入磁珠孵育时若出现沉淀，可每1-2 min轻弹管壁或吸打混匀。
6.   本产品仅可用于科研，不可用于诊断。