小鼠pan B细胞分选试剂盒

产品简介

小鼠 B 细胞分选试剂盒是通过阴性分选法从小鼠脾脏细胞的单细胞悬液中分离出pan B细胞。该试剂盒选用不同的生物素标记单克隆抗体对对非pan B 细胞进行标记，随后通过链霉亲和素磁珠去除非  pan B细胞，从而完成小鼠pan B细胞的分选。本产品15min即可获得目的细胞，使用前无需裂红处理，分选的细胞无异常激活，可立即用于下游实验。本产品需与磁力架配套使用。

产品组成

产品特点

纯度高：分选细胞的纯度高，可达 95% 以上。
活性高：分选后细胞功能保持完好，无异常激活，无抗体和磁珠标记。
易操作：无需使用分离柱，通过磁力架即可实现目标细胞分离。
速度快：最快只需 15 min 即可获得目标细胞。

产品保存

2-8℃保存，不可冷冻。有效期一年。

操作流程图：

finiget分必得细胞分选

使用说明

该操作流程适用于处理0. 1-2 mL的样品（多达2×108 cells）。

以分选小鼠脾脏B细胞为例：

1.   制备单细胞悬液：在 70 μm细胞筛网上研磨脾脏，以预冷的分选缓冲液冲洗细胞筛网，收集细胞悬液于50 mL 离心管中，500 g ，离心5 min后弃去上清。

· 分选缓冲液推荐使用含有1 mM EDTA和2%胎牛血清（FBS）的PBS ，需预先使用0.22 μm滤膜过滤除菌。缓冲液中不能含有钙离子、镁离子和生物素。也可以使用GOONIE 140-2001 细胞分选缓冲液。

2.   将细胞重悬于缓冲液中，调整细胞浓度为1× 108  cells/mL。

3.   吸取100 μL细胞悬液（1×107 cells）加入无菌流式管底部，再加入5 μL Mouse FcR Blocker ，混匀后继续加入10 μL Mouse pan B Cell Isolation Cocktail ，轻轻混匀，室温孵育10 min。

· 若分选更大数量的细胞可按比例增加Mouse FcR Blocker 和Mouse pan B Cell Isolation Cocktail的用量。

4.   孵育完成后，加入8 μL Streptavidin Beads ，轻轻混匀，室温孵育2.5 min。

· 磁珠在使用前需在涡旋震荡仪上充分混匀约30 s ，混匀后不可进行高速离心操作；若分选更大数量的细胞可按比例增加Streptavidin Beads的用量。

5.   孵育完成后，加入分选缓冲液将体积补至2.5 mL ，使用移液器轻轻吹打几次后将流式管置于磁力架上静置2.5 min。

· 实验体系不可超过2.5 mL ，以避免超过磁极的分选范围。

6.   将细胞悬液缓慢倒入无菌离心管中，此细胞悬液中即包含纯化的小鼠pan B细胞。

· 倾倒过程中流式管不能脱离磁力架。

7.   根据实验需要洗涤细胞后，将细胞重悬于所需缓冲液或培养基中，即可用于后续分子生物学或细胞生物学实验。

分选效果

Before isolation                                 After isolation

从C57BL/6小鼠脾脏细胞中分选B细胞，分选前后的细胞用APC anti-mouse CD3抗体（克隆号17A2）和FITC anti-mouse CD19抗体（克隆号1D3/CD19）标记后进行流式细胞仪分析，分选前后的pan B细胞纯度分别为58.4%和97.5%。

注意事项

1.   本试剂盒在保存和使用过程中应避免冷冻。
2.   建议使用低吸附移液器吸头和离心管，避免因吸附造成抗体和磁珠的损耗。
3.   分选过程应尽量轻柔，避免磁珠对细胞造成机械损伤。
4.   若后续进行细胞培养实验，分选过程需在无菌环境中进行。
5.   加入磁珠孵育时若出现沉淀，可每1-2 min轻弹管壁或吸打混匀。
6.   本产品仅可用于科研，不可用于诊断。