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非乙酰化CAMP ELISA试剂盒
对 cGMP 具有超亲和力,无需乙酰化处理即可检测,简化实验步骤,细胞和组织样本都适用,区别于市面传统试剂盒。
该试剂盒用于体外定量检测血清、血浆。组织匀浆,细胞裂解液,细胞培养上清,或其他相关生物液体中天然cGMP 浓度。
- 基于独特的小鼠单克隆cGMP抗体
- 市场唯一采用单克隆cGMP抗体的检测试剂盒(其他试剂盒均基于多克隆)
- 与多克隆cGMP抗体相比,该cGMP单抗对cAMP和ATP的选择性显著更高
- 避免了动物源多抗生产所伴随的批次间差异,从而保证了良好的重复性
非乙酰化CAMP ELISA试剂盒产品说明
| 灵敏度 | 18.4 fmol/ml |
| 检测范围 | 0.08pmol/ml-250pmol/ml |
| 特异性 | 可检测样本中cGMP (环磷酸鸟苷)的含量。且与其他类似物无明显交叉反应。 |
| 重复性 | 板内,板间变异系数均≦10% |
- cGMP 是小分子的环状核苷酸,以微量存在于动植物细胞和微生物中,被称其为细胞内的第二信使(激素为第一信使)。cGMP 由鸟苷酸环化酶产生,被磷酸二酯酶降解,因此激活鸟苷酸环化酶 或者抑制磷酸二酯酶,可以提高细胞内 cGMP 的含量。研究发现,cGMP 特异性磷酸二酯酶的抑制剂可用于人类疾病的治疗。如:cGMP 特异性磷酸二酯酶类型5可用于治疗 ED 等疾病。 cGMP 分子量只有345.21。所以cGMP的定量分析多采用竞争结合法,且cGMP在机体内的含量极低,为 pmol/L 级别,所以一种灵敏度高,特异性强。重复性高的 cGMP ELISA 检测试剂盒是广大 科研工作者,最理想的选择。
- 目前商业化提供的一些cGMP检测试剂盒主要使用的是非亲和纯化的cGMP多克隆抗体。尽管据称有特异性,但这些多克隆抗cGMP抗体与cAMP和GTP呈现一定程度的交叉反应。且在大多数细胞类型中,cGMP含量低于cAMP 100倍。
- 纽斯特生物的cGMP ELISA 检测试剂盒使用的是独一无二的鼠单克隆抗cGMP抗体,该单克隆抗cGMP抗体的特异性比cAMP、GTP等类似的小分子高出108 倍以上。相较于其他的多克隆抗体cGMP试剂盒,纽斯特生物cGMP ELISA试剂盒能显著的提高其灵敏性和特异性,且能有效避免来自动物多克隆抗体的批次间差异, 因此可以提供长久有效地可重复性定量检测。
- 此外,其他ELISA试剂盒的多克隆抗cGMP抗体与乙酰化cGMP的亲和力明显高于非乙酰化cGMP,而本试剂盒的单克隆cGMP抗体与乙酰化或非乙酰化cGMP具有同样的亲和力。因此,纽斯特生物cGMP ELISA试剂盒中的样品和标准品不需要乙酰化处理,从而明显缩短了分析时间,有效避免了乙酰化过程中的有机试剂的使用,为大家提供了一个更安全、更健康的工作环境。
非乙酰化CAMP ELISA试剂盒实验原理及研究背景
- 本试剂盒利用竞争酶联免疫分析方法来测定细胞提取物或体外腺苷酸环化酶实验中的 cGMP 的水平。包被羊抗鼠多克隆抗体在酶标板上,细胞提取物或体外腺苷酸环化酶实验中的cGMP 与固定数量的标记辣根过氧化物酶的 cAMP 竞争性的结合抗 cAMP单克隆抗体,采用已知浓度的 cGMP 标准品来做标准曲线。用酶标仪 在 450 nm 波长处测 OD 值,cGMP 浓度与 OD450值之间呈反比,通过绘制标准曲线计算出样品中 cGMP 的浓度。
- cGMP作为独特的第二信使 ,可调节细胞对各种外源和内源信号分子的反应. cGMP主要通过 激活蛋白激酶,控制特定的离子通道,磷酸二酯酶调节细胞环核苷酸浓度来调节不同的生理过程 ,如血管平滑肌松弛,上皮细胞电解质运输, 骨生长, 白细胞迁移, 轴突引导, 精子运动, 血小板蔓延以及血管通透性等。
- 通过鸟苷酸环化酶可以实现GTP转化为cGMP。在哺乳动物中 ,存在2种类型的鸟苷酸环化酶: 可溶性及膜结合的鸟苷酸 环化酶(8,10,11)。可溶性环化酶在一氧化氮与血红素辅基结合后 ,即被激 活。七层膜结合鸟苷酸环化酶 (即跨膜鸟苷酸环化酶或鸟苷酸环化酶微粒) 已被证实存在于人类基 因组中 ,鸟苷酸环化酶A和B是利尿钠肽受体 ,鸟苷酸环化酶C能被热稳定细菌肠毒素、鸟苷素和脲 激活。跨膜鸟苷酸环化酶的活性亦受胞内信号通路的其他受体信号所调控。
非乙酰化CAMP ELISA试剂盒组分
| Components | Description | Chemicals |
| cGMP Standard (100 µM) | 0.25 ml | 5,000 pmol/mL cGMP |
| HRP-cGMP Conjugate | 0.1 ml | cGMP Conjugate |
| cGMP Mouse Monoclonal antibody | 0.007 ml | Mouse Antibody |
| 10 x Wash Buffer | 15 ml | 0.1% Bovine Serum Albumin 0.05% Tween-20 |
| 1x Wash Buffer | 2 X 6 ml | 0.01% Bovine Serum Albumin 0.005% Tween-20 |
| Substrate A solution | 10 ml | 0.08% Urea-H2O2 0.1% Sodium benzoate |
| Substrate B solution | 10 ml | 1% DMSO 1% Acetone 20 mg per 100 ml, 3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine 0.3 g per 100 ml Citric acid |
| Neutralizing Reagent | 6 ml | 0.4 M Tris-HCl |
| Stop solution | 6 ml | 2M Sulfuric acid |
| Goat anti-Mouse IgG Microtiter Plate | Plastic Plate | Goat anti-Mouse antibody |
- 收到试剂盒后 ,若不立即使用 ,请按照标签说明存储在相应的温度。CAMP-HRP 浓缩液,及A,B显色液应避光保存。试剂盒所需自备物品
- 酶标仪(450 nm波长滤光片)
- 高精度移液器,EP管及一次性吸头:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
- 双蒸水或去离子水
- 吸水纸
- 加样槽
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