小鼠破骨细胞诱导培养基

适用于RAW264.7细胞系，原代BMDM细胞

¥1,180.00

规格：100mL

SKU：XRmOIM-100 分类：细胞培养相关品牌：西瑞无限

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产品详情

RAW264.7细胞破骨诱导5天

原代BMDM破骨诱导5天

原代BMDM破骨诱导5天

小鼠破骨细胞诱导培养基

XR mOIM - Mouse Osteoclast Induction Medium

XR mOIM可适用于小鼠骨髓原代巨噬细胞及巨噬细胞系RAW264.7的破骨诱导，本产品包含多种细胞因子、必需和非必需氨基酸、维生素、激素、微量元素和低浓度的胎牛血清，无需添加其他额外成分。

规格	PH	内毒素	细菌/真菌	支原体	渗透压	储存	有效期
100mL	7.1-7.3	≤0.25 EU/mL	阴性	阴性	280-320	-20℃，避光解冻后4℃避	6个月解冻后2周内

使用方法

RAW264.7细胞破骨诱导

将RAW264.7单细胞悬液以7x103-9x103 cells/孔密度接种到24孔细胞培养板中培养24h﹐细胞正常贴壁后更换XR mOIM培养基；
此后每48h更换XR mOIM培养基，可每天镜下观察细胞状态；
诱导第5/6天时进行TRAP染色，鉴定破骨细胞。

原代BMDM破骨诱导

将原代BMDM细胞用XR mOIM培养基以5×10 4-7×104 c ells/孔接种到24孔板中；
此后每48h更换XR mOIM培养基，可每天镜下观察细胞状态；
诱导第5/6天时进行TRAP染色，鉴定破骨细胞。

（原代BMDM分离诱导培养可参考XR mBMDM 培养基使用说明）
注意：使用前请将培养基4℃过夜解冻，如需分装首次解冻后混匀分装复冻，避免反复冻融。
培养基使用过程中取出当日用量进行预热即可，避免将整瓶培养基反复预热。
本产品不含青/链霉素，如实验需要请额外添加。
本产品仅用于科研实验，不可用于临床治疗。

Raw264.7破骨诱导常见问题解答

XR小鼠破骨细胞诱导培养基需不需要加双抗

经XR小鼠破骨细胞诱导培养基不包含双抗，可根据实验需求自行添加，常规使用100x青链霉素双抗储液，终浓度1x工作浓度(若后续要做RNA测序、蛋白质谱等高精度检测，建议不添加双抗，避免抗生素干扰细胞本底表达）。

Raw264.7诱导标准周期、换液节奏?

标准诱导周期是5-7天，全程只换液，不消化、不传代，静态诱导培养。

换液规则:待细胞接种后镜下观察细胞完全贴壁舒展、漂浮死细胞极少时，可更换破骨诱导液;后续每48h更换一次新鲜的诱导培养基;较为明显的多核破骨细胞将在分化培养4天后开始出现，即4天左右开始融合，5-6天破骨细胞成熟，可以进行TRAP染色鉴定。

Raw264.7的接种密度推荐是多少?

RAW264.7破骨诱导密度是第一关键，过密容易聚团、过稀无法细胞融合，无法形成多核破骨细胞。

推荐密度:12孔板建议接种的细胞量是1.4x104-1.8x104cells(1mLXR小鼠破骨细胞诱导培养基)，24孔板建议是7x103-9x103cells(500uLXR小鼠破骨细胞诱导培养基)，其它孔板请自行换算密度。

密度异常问题:密度过高，细胞聚团，营养耗尽，细胞大量漂浮死亡，无分化;密度过低:细胞间距过大，无法发生细胞融合，较难形成多核破骨细胞。

如果破骨诱导过程中Raw264.7聚团比较厉害有什么比较好的建议呢?

1.设置多个密度梯度，筛选最合适的接种密度;再放入培养箱3.细胞代数最好在12-15代以内，挑选细胞状态比较好的时候再做;
2.铺板时充分混匀细胞悬液，铺完后可以在室温静置30min让细胞均匀沉降，
4.首次换液沿孔壁冲液幅度要轻，否则液体流动会把零散细胞冲刷聚拢成簇;
注意:改善抱团需优先优化单细胞悬液制备

如何判断是否有破骨细胞形成？

5-6天破骨细胞成熟，可以进行TRAP染色鉴定。观察诱导后多核破骨细胞形态:

未成熟融合细胞(前体细胞):细胞核3~4个，胞体偏小，TRAP染色弱阳性，仅细胞膜融合，不具备骨吸收功能，不计入成熟破骨统计;

成熟破骨细胞(通用计数标准):胞浆呈深红色/紫红色，苏木素复染胞核为蓝色、甲基绿复染胞核呈浅绿/绿色，细胞核≥5个，胞体明显膨大，TRAP强阳性;

其它注意事项

1.细胞传代过老:RAW264.7传代超过20代，分化能力大幅下降，务必使用低代次(5-15代)细胞;

2.细胞状态差:细胞抱团、形态梭形异常、悬浮死细胞多，基础状态不达标无法分化，同时，刚复苏的细胞需要传1-2代恢复状态再铺板，刚复苏的细胞直接铺板会使诱导效率降低;

3.换液操作过猛:RAW264.7贴壁偏弱，直接直冲孔底吹打会冲掉细胞，换液需沿孔壁缓慢加液、弃液，首次换液可以半换，减少对细胞的扰动;

4.诱导液储存与预热规范:XR小鼠破骨细胞诱导培养基需长期置于-20°C避光保存，严禁4°C长期存放和反复冻融;首次解冻后建议根据实验用量分装为单次使用小管，后续按需解冻使用，可有效避免因子失活、分化不稳定;每次使用前需37°C水浴充分预热混匀，禁止低温培养基直接换液，防止细胞应激受损、分化受阻(低温培养基直接换液会造成细胞应激损伤，阻碍分化融合)。