hMCDM | 人间充质干细胞成软骨诱导分化培养基

软骨球诱导

1. 将4×10⁵个待分化细胞转移到15mL离心管中，250g离心4min。
2. 吸去多余上清，加入0.5mL诱导分化培养基重悬细胞沉淀，150g离心5min。
3. 吸去多余上清，重新加入0.5mL诱导分化培养基重悬细胞沉淀，150g离心5min。
4. 吸去多余上清，加入0.5mL诱导分化完全培养基重悬，150g离心5min。
5. 离心结束后小心将离心管盖拧松，不可摇动或吹打细胞团，置于37℃，5%CO₂培养箱中静置。
6. 培养48h后，离心管内细胞团换液0.5mL，轻弹离心管底部使软骨球脱离管底即可。
7. 每2-3天换新鲜的分化培养基，每次换液0.5mL，换液后轻弹细胞团使其能脱壁漂浮。
8. 持续诱导18-25天后，直至形成直径2mm的软骨球，即可切片染色。

贴壁软骨蛋白聚糖诱导

1. 取适量0.1%明胶覆盖培养皿底面，37°C静置30分钟，吸取晾干即可使用。
2. 取对数生长期的细胞，按照2×104/cm2的细胞密度接种至包被后的培养器皿中，于37℃，5%CO₂培养环境下培养至汇合度80%，弃掉上清，加入成软骨诱导分化培养基。
3. 待分化细胞于37℃，5%CO2培养环境下持续培养约18-25天，每2-3天换液一次，并注意观察软骨多糖沉积变化，决定终止细胞诱导的时间，并进行染色鉴定。

注意：

• 使用前请将培养基4℃过夜解冻，如需分装首次解冻后混匀分装即可，避免反复冻融。
• 培养基使用过程中取出当日用量进行预热即可，避免将整瓶培养基反复预热。
• 本产品不含青/链霉素，如实验需要请额外添加。
• 本产品仅用于科研实验，不可用于临床治疗。