人间充质干细胞化学成分明确培养基套装

XRMSCCD-500

西瑞无限MSC-CD人间充质干细胞培养基适用于人类脂肪、骨髓和脐带来源的间充质干细胞分离和扩增，同时MSC-CD为化学成分限定培养基，无人源及动物源成分，可完美维持细胞生物学特性与多向分化潜能。此外，西瑞无限MSC-CD培养基属于无外泌体培养基，极低的内源外泌体背景可为高质量的干细胞外泌体收集与下游应用提供了极其纯净的理想平台。

西瑞无限MSC-CD人间充质干细胞培养基包括：MSC-CD专用培养基及MSC-CD包被液，组分可单独售卖。

• 化学成分明确 ，不含异源动物源组分 ，不含人血清 ，且不含血小板裂解物、AB 血浆等成分；
• 培养基属于无外泌体培养基 ，适用于间充质干细胞分泌的外泌体的收集及下游应用；
• 可搭配微载体进行3D培养
• 可完整保留干性及三系分化能力

一、准备工作

• 培养瓶包被，按每毫升MSC-CD培养基加入4微升﹙μL﹚包被液的比例配制，每平方厘米﹙cm²﹚培养底面加入0.1mL包被液。孵育条件：2-8℃孵育过夜或37℃孵育60min。
• 孵育结束后将培养瓶内包被液无需吸除，培养瓶及包被培养基可直接用于后续细胞培养；孵育后的器皿若暂不使用﹐密封保存于2-8℃，请于3天内使用。

二、间充质干细胞接种、培养和传代（以T175为例）

• 取17.5mL MSC-CD培养基﹐并加入70μL包被液进行混匀，加入TC处理的培养瓶中，2-8℃孵育过夜或37℃孵育60min;
• 孵育结束后向培养瓶中加入12mL预温到室温的MSC-CD培养基﹙培养瓶内总体积约30mL﹚，加入培养基时，避免液流冲洗到T175的包被层表面，可以让培养液沿培养瓶侧面流至培养瓶底部，再将培养瓶平放，转动T175培养瓶使培养基覆盖细胞培养表面；
• 间充质干细胞计数后，按照0.5-0.8x104/cm2的细胞密度接种到MSC-CD培养基中，轻转培养瓶，使细胞在液体中均匀散开﹔
• 将T175培养瓶平放置于CO2培养箱中，培养条件为5% CO2，37℃，饱和湿度；
• 根据细胞生长状态，可以在接种后48-72h换液﹕用移液管将旧培养基完全吸出，再补充30mL预温至室温的MSC-CD培养基。换液操作能够去除未贴壁细胞、细胞碎片和细胞代谢产物，维持良好的细胞活性；
• 待细胞汇合度达到85%-90%﹙一般为72h-96h﹐且不建议汇合度更高﹚﹐将T175内的培养基吸出弃掉，加入15mL D-PBS，转动
• T175让D-PBS流动以清洗贴壁细胞，清洗后将D-PBS吸出弃掉。在T175中加入6mL稀释后的温和消化酶﹙温和消化酶需用
• D-PBS按1􆿻3的比例稀释后使用，温和消化酶无需血清中止消化，适合无血清的细胞培养体系﹚，放入细胞培养箱3-5min，在显微镜下确认细胞收缩变圆或开始从细胞培养瓶底面脱落﹐加入12mL MSC-CD或D-PBS以稀释消化酶，并轻轻拍打培养瓶使细胞脱落，未脱落的细胞可以轻轻吹打细胞培养表面，最后将12mL细胞悬液转入离心管，400g离心3min，可以收集离心管底部的细胞沉淀，用于计数和传代等操作。

• 包被液禁止水浴解冻，室温或2-8℃解冻后现用现配，剩余包被液可2-8℃避光储存，避免反复冻融；
• 培养基禁止水浴解冻，室温或2-8℃解冻，未用完的MSC-CD培养基需在2-8℃保存，避免反复冻融；
• 培养周期为96h及以上时，建议在接种后48-72h进行换液操作，培养周期为72h及以下时，可不进行换液操作；新复苏的细胞，可以在接种24h后进行一次换液操作；
• 不建议培养超过120h或使细胞汇合度大于100%，如果细胞发生聚集和叠层生长﹐可能导致细胞结成片状且难以消化，使细胞受损衰老，影响继续传代；
• 使用稀释后的温和酶消化；
• 如果之前用其他培养基做原代分离或传代，建议在MSC-CD包被液包被后的培养瓶内用原培养基和XR MSC-CD各50%培养一代做适应，后续再完全替换成MSC-CD培养体系。
• 本产品可搭配微载体进行3D培养（具体根据自己所使用的微载体进行测试）。

2. XR人间充质干细胞培养基（化学成分限定）传代后诱导分化结果

3. 流式鉴定结果：CD34、CD73、CD105、CD90

4.使用细胞工厂规模化制备外泌体：将P2代细胞复苏并扩增传代至P4代后，接种于细胞工厂进行培养。经12天连续生产，累计收获外泌体总数达2.49x10¹²个

5.基于微载体3D培养体系的外泌体获取：采用微载体进行3D细胞培养，生产周期为12天。在1L反应器培养基体系中灌流培养，累计收获外泌体总量达3.56×10¹³个