小鼠结肠类器官培养基套装（出芽版）

西瑞无限小鼠结肠类器官培养试剂盒是一款专为用于构建、维持和扩增小鼠结肠类器官的细胞培养基产品。本产品由我司自主研发，不含血清，成分明确。

小鼠结肠类器官完全培养基包括：小鼠结肠类器官基础培养基及添加物，组分不单独售卖。

• 解剖C57小鼠，用手术剪刀取出结肠。将结肠转移到培养皿中，用手术剪刀剖开结肠，清除肠道内容物，用预冷的PBS冲洗3次。
• 取15mL离心管，将清洗好的结肠用剪刀剪成1mm x 1mm的肠段切片。加入10mL预冷的PBS摇晃离心管冲洗结肠片段，后去除管中的肠道内容物。过程重复三次。
• 加入10mL结肠组织消化液，4℃摇床消化25min。
• 消化结束后去除消化液，加入5mL终止液终止消化。用5mL移液管轻轻吹打消化后的结肠片段。
• 吹打结束后。将离心管中组织和消化液全部用70μm细胞筛过滤，去除未消化组织，后300g离心5min去上清。
• 根据隐窝数量加入基质胶（8-10个隐窝/μL基质胶）,将细胞-基质胶混合物滴加到24板孔中﹙每滴约30-40μL）。37°C, 5% CO₂培养箱中固化15-25min。
• 固化结束后，在胶滴周围小心加入700μL预热的小鼠肠道类器官培养基，37℃，5% CO2条件下进行培养。

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图1-4：产品3天内形成类器官，稳定7天内可以传代