BV-2小鼠胶质瘤细胞生长特性及形态异常问题

新闻资讯 BV-2800

细胞来源介绍

BV2小鼠小胶质细胞,来源于1990年,由E·Blasi应用携带癌基因v-raf/v-myc的反转录病毒J2感染原代培养的C57BL/6小鼠小胶质细胞而获得的永生细胞系,表达核v-myc、染色体v-raf癌基因,表面表达envgp70抗原。免疫组化结果显示BV2为MAC1、MAC2阳性,而MAC3、胶质细胞原纤维酸性蛋白、半乳糖脑苷脂为阴性。

 该细胞系不仅高度纯化, 而且基本具备了原代培养的小胶质细胞的形态学、表型以及各项功能特点, 相对较易培养, 目前被广泛的运用于科研究当中。

生长特性及注意事项

细胞形态不均一:

BV2细胞呈半贴壁生长,它的形态并不规则,存在圆形和梭形两种。悬浮细胞为圆形,贴壁细胞既有圆形也有梭形。由于圆形细胞折光率高,它的边缘看起来是发亮的;梭形细胞则向两端伸出黑色突起。传代时需要单独收集悬浮和贴壁部分的细胞进行处理。

生长较快

BV2细胞生长较快,培养基消耗较快,培养时注意密切关注细胞状态,密度较高、培养基有变黄趋势时及时换液避免细胞状态变差;密度到达80%时及时进行传代,以防细胞过度生长。

对PH值敏感

BV2对培养基的pH比较敏感,过酸或过碱的培养基都可能导致细胞状态变差甚至不贴壁。因此需要密切注意培养基的颜色变化,冰箱中变紫的培养基应先在CO2培养箱中平衡至恢复红色再使用。

传代建议:

BV2细胞传代比例1:3-1:6,传代周期2-3天,中途每2~3天需要进行补液或者换液,维持细胞所需营养。传代时收集悬浮细胞在和通过胰酶消化后的贴壁细胞合并一起分瓶传代培养。

形态异常及解决方法

基本飘起都不贴壁:

培养基PH值偏碱:Bv-2对培养基酸碱度比较敏感。PH偏碱时候,培养基呈紫红色。在偏碱培养基中培养数小时后将会全部飘起。 

给细胞换上新鲜配制的培养基,并使用透气瓶

细胞密度过大:bv-2生长速度快,生长48小时后会导致密度过大,营养成分减少,容易出现大量细胞漂浮的情况。

及时换液即可。

细胞形态变为阿米巴样

小胶质细胞是一种可塑性极高的细胞,可通过特定因素激活,从而发挥其免疫功能。从静息态变为激活态的过程中,小胶质细胞形态也随之发生改变。

实验中常用细菌脂多糖(LPS)和干扰素-γ(IFNγ),分别模拟细菌和病毒感染,来刺激小胶质细胞激活。受到刺激的小胶质细胞突起缩短变厚,胞体增大,呈现阿米巴样,如果细胞没有受到任何刺激,就已经呈现阿米巴样,那么细胞有可能发生了自分化。

其原因可以从以下几点考虑:

① 存在潜在微生物污染,刺激细胞自分化。

通过去掉培养基中的抗生素确定污染类型,并排查污染源头。

② 使用的胎牛血清内毒素高,内毒素刺激细胞自分化。

尝试使用其他胎牛血清品牌,或许能得到改善。

分枝状细胞多,圆形细胞少

这种形态往往伴随着细胞生长慢或生长停滞的情况。由于圆形细胞增殖速度较快,在圆形细胞缺失的状况下,整体增殖速度就会减慢。

由于BV2是一种半贴壁半悬浮细胞,贴壁和悬浮细胞的比例并不固定,当悬浮细胞较多时,换液和传代时要将悬浮细胞收集,避免圆形细胞的大量损失。

细胞容易聚团

BV2是一种半贴壁半悬浮细胞,它的形态并不规则,存在圆形和梭形两种。当圆形细胞聚成团块处于贴壁细胞上和培养基里时,说明细胞处于快速增值分裂的生长状态,及时传代处理即可。 

贴壁细胞很瘦小

Bv-2细胞出现瘦小、拉丝、不增值等情况时,可能是细胞存在微生物污染,刺激后自行分化、血清营养价值不高,消化传代过度导致细胞膜损伤等情况导致细胞很瘦小。建议排查污染源,更换血清,分化后的细胞贴壁更牢,极难消化,因此应尽量缩短消化时间,预防细胞分化,重新复苏新种子。

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    BV2小鼠小胶质细胞,来源于1990年,由E·Blasi应用携带癌基因v-raf/v-myc的反转录病毒J2感染原代培养的C57BL/6小鼠小胶质细胞而获得的永生细胞系,表达核v-myc、染色体v-raf癌基因,表面表达envgp70抗原。免疫组化结果显示BV2为MAC1、MAC2阳性,而MAC3、胶质细胞原纤维酸性蛋白、半乳糖脑苷脂为阴性。

     该细胞系不仅高度纯化, 而且基本具备了原代培养的小胶质细胞的形态学、表型以及各项功能特点, 相对较易培养, 目前被广泛的运用于科研究当中。

    生长特性及注意事项

    细胞形态不均一:

    BV2细胞呈半贴壁生长,它的形态并不规则,存在圆形和梭形两种。悬浮细胞为圆形,贴壁细胞既有圆形也有梭形。由于圆形细胞折光率高,它的边缘看起来是发亮的;梭形细胞则向两端伸出黑色突起。传代时需要单独收集悬浮和贴壁部分的细胞进行处理。

    生长较快

    BV2细胞生长较快,培养基消耗较快,培养时注意密切关注细胞状态,密度较高、培养基有变黄趋势时及时换液避免细胞状态变差;密度到达80%时及时进行传代,以防细胞过度生长。

    对PH值敏感

    BV2对培养基的pH比较敏感,过酸或过碱的培养基都可能导致细胞状态变差甚至不贴壁。因此需要密切注意培养基的颜色变化,冰箱中变紫的培养基应先在CO2培养箱中平衡至恢复红色再使用。

    传代建议:

    BV2细胞传代比例1:3-1:6,传代周期2-3天,中途每2~3天需要进行补液或者换液,维持细胞所需营养。传代时收集悬浮细胞在和通过胰酶消化后的贴壁细胞合并一起分瓶传代培养。

    形态异常及解决方法

    基本飘起都不贴壁:

    培养基PH值偏碱:Bv-2对培养基酸碱度比较敏感。PH偏碱时候,培养基呈紫红色。在偏碱培养基中培养数小时后将会全部飘起。 

    给细胞换上新鲜配制的培养基,并使用透气瓶

    细胞密度过大:bv-2生长速度快,生长48小时后会导致密度过大,营养成分减少,容易出现大量细胞漂浮的情况。

    及时换液即可。

    细胞形态变为阿米巴样

    小胶质细胞是一种可塑性极高的细胞,可通过特定因素激活,从而发挥其免疫功能。从静息态变为激活态的过程中,小胶质细胞形态也随之发生改变。

    实验中常用细菌脂多糖(LPS)和干扰素-γ(IFNγ),分别模拟细菌和病毒感染,来刺激小胶质细胞激活。受到刺激的小胶质细胞突起缩短变厚,胞体增大,呈现阿米巴样,如果细胞没有受到任何刺激,就已经呈现阿米巴样,那么细胞有可能发生了自分化。

    其原因可以从以下几点考虑:

    ① 存在潜在微生物污染,刺激细胞自分化。

    通过去掉培养基中的抗生素确定污染类型,并排查污染源头。

    ② 使用的胎牛血清内毒素高,内毒素刺激细胞自分化。

    尝试使用其他胎牛血清品牌,或许能得到改善。

    分枝状细胞多,圆形细胞少

    这种形态往往伴随着细胞生长慢或生长停滞的情况。由于圆形细胞增殖速度较快,在圆形细胞缺失的状况下,整体增殖速度就会减慢。

    由于BV2是一种半贴壁半悬浮细胞,贴壁和悬浮细胞的比例并不固定,当悬浮细胞较多时,换液和传代时要将悬浮细胞收集,避免圆形细胞的大量损失。

    细胞容易聚团

    BV2是一种半贴壁半悬浮细胞,它的形态并不规则,存在圆形和梭形两种。当圆形细胞聚成团块处于贴壁细胞上和培养基里时,说明细胞处于快速增值分裂的生长状态,及时传代处理即可。 

    贴壁细胞很瘦小

    Bv-2细胞出现瘦小、拉丝、不增值等情况时,可能是细胞存在微生物污染,刺激后自行分化、血清营养价值不高,消化传代过度导致细胞膜损伤等情况导致细胞很瘦小。建议排查污染源,更换血清,分化后的细胞贴壁更牢,极难消化,因此应尽量缩短消化时间,预防细胞分化,重新复苏新种子。

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