BV2细胞背景脏有小黑点是为什么？

BV-2细胞背景有很多大小不一的小黑点，不会动，PBS洗了不会变少，细胞生长速度正常，就是背景太脏了，而且还会有一坨一坨的不知道是啥，烦死了。

这是来自小红书网友的提问。

在培养细胞的过程中，许多人都会遇到类似的问题，开始背景干净，但逐渐就脏了，什么原因呢？

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细胞培养过程中出现的黑点，是污染吗？

一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先肉眼观察培养液是否变浑浊，如果变浑浊，基本可以确定是污染。

如果肉眼观察培养液没有变浑浊：在显微镜下观察黑点大小和形状是否规则，是否运动，是做布朗运动还是呈直线型快速移动。

如果黑点大小不规则，做布朗运动，黑点可能是细胞碎片(可能是细胞状态不佳或者消化过度引起的)，也可能是血清反复冻融产生的蛋白沉淀引起的，也可能是细胞的代谢产物。如果黑点大小一致，快速移动，很可能是细菌污染。

如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。 如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化。

那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关

1.细胞生长过老，破碎的细胞残骸
2.血清质量不好，反复冻融的结果
3.配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长
4.配制培养基的水质、容器不合格

要如何预防细胞培养中黑点的产生呢？

掌握细胞传代的最佳时机，不要细胞长老了再传代；

掌握好消化时间，防止消化过度产生细胞碎片；

减少血清等试剂的冻融次数；

将培养液的PH调到最佳；

严格控制水质和器皿的清洁。

黑点已经产生了，如何进行处理？

如果判定黑点是污染，请及时将细胞处理后丢弃。其他情况，可参照以下进行：
如果是悬浮细胞：收集细胞上清慢速离心（500-600 rpm/min，5-6 min）并更换新的培养瓶。

如果是贴壁细胞：将细胞用PBS洗2-3遍，洗的时候，轻轻拍打培养瓶，让贴壁不牢的碎片和颗粒脱落，再弃去PBS，消化时先加低浓度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右，让细胞间隙中的颗粒和碎片脱落下来，去掉低浓度胰酶，然后正常消化细胞，将收集的细胞悬液慢速离心（500-600 rpm/min，5-6 min）并更换新的培养瓶，并可以尝试适当增加血清浓度进行培养。

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